Plásmido Doble Nickase (h) HoxA3: sc-404634-NIC

HOXA3 codifica el factor de transcripción con homeobox HoxA3, un regulador que se une al ADN de manera específica de secuencia y que ayuda a establecer el patrón antero‑posterior y la identidad regional durante el desarrollo embrionario. HoxA3 coordina programas de expresión génica que controlan la morfogénesis, la migración celular y la diferenciación, integrándose con redes reguladoras HOX más amplias y con el control transcripcional mediado por la cromatina. La desregulación de la expresión de HOXA3 o las alteraciones en la regulación del clúster HOX se han implicado en anomalías del desarrollo y contribuyen a estados transcripcionales oncogénicos en múltiples contextos tumorales. En modelos celulares humanos, HOXA3 se estudia comúnmente para cartografiar circuitos que especifican linajes, investigar el control transcripcional de vías del desarrollo y caracterizar los resultados fenotípicos de la perturbación de la red HOX.

HoxA3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HOXA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HOXA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HOXA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HOXA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.