Plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxA10 (m): sc-420900

Présentation

Hoxa10 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA10, un régulateur se liant à l’ADN qui organise l’axe antéro-postérieur embryonnaire et spécifie l’identité régionale au cours du développement des voies urogénitales et reproductrices. Chez la souris, HoxA10 contribue aux réseaux développementaux de régulation génique en coordonnant des programmes transcriptionnels qui contrôlent la détermination du destin cellulaire, la différenciation et la morphogenèse, avec des effets dépendants du contexte sur la prolifération et le remodelage tissulaire. Son activité s’articule avec des cofacteurs HOX/TALE plus larges et avec la régulation de la chromatine afin d’établir des états transcriptionnels spécifiques de chaque segment. Une expression dérégulée de HOXA10 a été associée à une différenciation hématopoïétique altérée et à des programmes transcriptionnels leucémogènes, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles de troubles du développement et de spécification de lignées pertinente pour le cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxA10 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hoxa10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hoxa10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hoxa10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HoxA10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hoxa10 pour l'étude de la signalisation de HoxA10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hoxa10 essentiels à la fonction de HoxA10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hoxa10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HoxA10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HoxA10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hoxa10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HoxA10 plasmide HDR (m) et le HoxA10 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hoxa10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hoxa10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.