Homer-2a/b CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402910-ACT

HOMER2 kodiert das Gerüstprotein Homer-2a/b, eine Komponente der postsynaptischen Dichte, die metabotrope Glutamatrezeptoren der Gruppe I mit intrazellulären Effektoren koppelt, darunter IP3-Rezeptoren, Shank-Komplexe und TRPC-Kanäle. Durch die Organisation von Rezeptor‑Effektor-Assemblies reguliert Homer-2a/b die Ca2+-Signalübertragung, synaptische Plastizität, aktivitätsabhängige Transkriptionsprogramme und den Umbau des Zytoskeletts in erregbaren Zellen. Die HOMER2-abhängige Signalgebung wurde mit der Funktion neuronaler Schaltkreise und Neuroadaptation in Verbindung gebracht, und eine veränderte Expression oder Netzwerk-Konnektivität von Gerüstproteinen der HOMER-Familie ist mit neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen assoziiert. Zusätzlich zu ZNS-Kontexten trägt HOMER2 zur übergeordneten GPCR-Signalarchitektur bei und ist damit relevant für Studien zur Reiz‑Antwort-Kopplung und zur Dynamik von Proteinkomplexen.

Homer-2a/b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOMER2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Homer-2a/b Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOMER2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOMER2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Homer-2a/b-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOMER2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Homer-2a/b-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Homer-2a/b-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOMER2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.