Plasmide Double Nickase (m) hnRNP U: sc-424561-NIC

La souris Hnrnpu code hnRNP U, une protéine nucléaire de liaison à l’ARN et à l’ADN exprimée de façon ubiquitaire, qui sert d’échafaudage à des complexes ribonucléoprotéiques et contribue à l’organisation de la chromatine. hnRNP U participe au traitement des pré-ARNm, à l’épissage alternatif et à la régulation de l’expression génique en reliant les transcrits naissants à l’architecture nucléaire et à la machinerie transcriptionnelle. Elle a été impliquée dans des voies contrôlant la stabilité du génome, le métabolisme de l’ARN et des programmes transcriptionnels associés au cycle cellulaire, via des interactions avec des longs ARN non codants et des facteurs associés à la chromatine. Une dérégulation du traitement de l’ARN et de l’organisation nucléaire liés à HNRNPU est associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une excitabilité neuronale altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du système nerveux et en régulation génique.

hnRNP U Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hnrnpu dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hnrnpu. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hnrnpu. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hnrnpu.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.