Plasmide Double Nickase (h) hnRNP U: sc-401375-NIC

HNRNPU code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène U (hnRNP U), une protéine de liaison à l’ARN associée à la chromatine qui couple la transcription au traitement du pré‑ARNm et coordonne l’organisation du génome à un niveau supérieur. hnRNP U participe à l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II, à l’épissage alternatif et à la localisation des ARN, et contribue à l’architecture nucléaire par des interactions avec les régions d’attachement à l’échafaudage/la matrice (S/MAR) et avec des longs ARN non codants. Par ces fonctions, elle influence des voies impliquées dans la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée. La dérégulation ou la perte d’activité de hnRNP U a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des réseaux d’expression génique altérés, pertinents pour les maladies neurologiques et la biologie du cancer.

hnRNP U Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HNRNPU dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HNRNPU. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HNRNPU. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HNRNPU.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.