Plásmido Doble Nickase (h) hnRNP L: sc-402196-NIC

El gen humano **HNRNPL** codifica **hnRNP L**, una proteína de unión a ARN que reconoce elementos ricos en CA para coordinar el *splicing* alternativo del pre-ARNm, la estabilización de transcritos y el procesamiento nucleocitoplasmático del ARN. hnRNP L funciona dentro de complejos del espliceosoma y de ribonucleoproteínas para moldear la inclusión de exones y el acoplamiento de la transcripción con la maduración del ARN, influyendo en programas como el control del ciclo celular y la expresión génica sensible al estrés. Mediante la regulación de la expresión específica de isoformas, hnRNP L puede modular a nivel postranscripcional salidas de señalización, incluidas vías como MAPK y rutas relacionadas con la apoptosis. La actividad desregulada de hnRNP L y las alteraciones del *splicing* se han asociado con fenotipos proliferativos y patrones anómalos de procesamiento de ARN observados en diversas enfermedades humanas, lo que lo convierte en una diana valiosa para estudios mecanísticos de la regulación génica dependiente del *splicing*.

hnRNP L El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HNRNPL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HNRNPL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HNRNPL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HNRNPL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.