Plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP E2 (h): sc-402274

Présentation

PCBP2 code la protéine humaine de liaison à l’ARN hnRNP E2, un facteur se liant au poly(C) qui s’associe à l’ARN simple brin pour réguler l’épissage des ARNm, leur stabilité, leur export nucléaire et leur traduction. hnRNP E2 participe au contrôle post-transcriptionnel de l’expression génique en coordonnant des complexes ribonucléoprotéiques qui déterminent le devenir des transcrits et la production protéique, notamment via la modulation du silencement traductionnel dépendant des UTR et de programmes de maturation de l’ARN. Par ces activités, PCBP2 influence les réponses au stress cellulaire ainsi que les voies de prolifération et de différenciation, et fait l’objet d’études fréquentes dans le contexte d’un métabolisme de l’ARN dérégulé. Des altérations de la fonction ou de l’expression de PCBP2/hnRNP E2 ont été associées à des phénotypes pertinents pour la maladie, notamment la signalisation oncogénique et des modifications des interactions hôte–virus médiées par des réseaux de régulation de l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP E2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PCBP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PCBP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PCBP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine hnRNP E2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PCBP2 pour l'étude de la signalisation de hnRNP E2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PCBP2 essentiels à la fonction de hnRNP E2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PCBP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le hnRNP E2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le hnRNP E2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PCBP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le hnRNP E2 plasmide HDR (h) et le hnRNP E2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PCBP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PCBP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.