Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP D0: sc-401911-ACT

HNRNPD code hnRNP D0 (AUF1), une protéine liant l’ARN qui reconnaît les éléments riches en AU dans les régions 3′ UTR et module la dégradation et la traduction des ARNm. En contrôlant la stabilité de transcrits impliqués dans l’inflammation, les réponses au stress, la progression du cycle cellulaire et l’apoptose, hnRNP D0 contribue à façonner les réseaux de régulation génique post-transcriptionnels et la protéostasie. Elle participe à l’assemblage de complexes ribonucléoprotéiques et influence les processus alternatifs de maturation de l’ARN, ce qui la relie à des programmes de signalisation tels que les sorties transcriptionnelles associées aux cytokines et à NF-κB, ainsi qu’à la sénescence cellulaire. Une expression altérée de hnRNP D0 ou une activité de liaison à l’ARN modifiée a été associée à une production de cytokines dérégulée et à des phénotypes oncogéniques, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude du métabolisme de l’ARN pertinent pour les maladies.

hnRNP D0 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNRNPD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP D0 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNRNPD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNRNPD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP D0. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNRNPD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP D0 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP D0 dans les cellules tumorales présentant une expression de HNRNPD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.