Plasmide Double Nickase (h) hnRNP C1/C2: sc-400993-NIC

HNRNPC code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène C1/C2 (hnRNP C1/C2), des protéines nucléaires abondantes se liant à l’ARN, qui s’assemblent sur le pré-ARNm naissant afin de réguler le choix des sites d’épissage, la maturation de l’ARNm et la stabilité des transcrits. hnRNP C1/C2 contribue à la fidélité du traitement de l’ARN en entrant en compétition avec U2AF2 sur des segments polyuridiniques cryptiques, limitant ainsi l’exonisation aberrante de séquences dérivées d’Alu et modulant le profil des isoformes produites. Par ces activités, elle influence des programmes plus larges d’expression génique liés au contrôle du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la protéostase, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte des dérégulations de l’ARN observées dans des modèles de cancer et de maladies neurodégénératives. Une expression ou une fonction altérée de HNRNPC a également été associée à des changements de la signalisation immunitaire innée et à des réseaux transcriptionnels d’adaptation au stress, induits par une perturbation du métabolisme de l’ARN.

hnRNP C1/C2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HNRNPC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HNRNPC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HNRNPC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HNRNPC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.