hnRNP A0 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406924-ACT

HNRNPA0 kodiert hnRNP A0, ein RNA-bindendes Protein, das mit heterogenen nukleären Ribonukleoprotein-Komplexen (hnRNP) assoziiert und dadurch die posttranskriptionale Genregulation beeinflusst. hnRNP A0 wird mit der Kontrolle der mRNA-Stabilität und der Translation in Verbindung gebracht, darunter Transkripte, die an der Zellzykluskontrolle und stressresponsiven Signalwegen beteiligt sind, was es mit dem breiteren RNA-Stoffwechsel sowie Checkpoint-Signalwegen verknüpft. Durch die Modulation des Schicksals spezifischer mRNAs kann hnRNP A0 zelluläre Antworten auf DNA-Schäden, Entzündungen und Proliferationssignale beeinflussen. Eine dysregulierte Aktivität der hnRNP-Familie und veränderte RNA-Prozessierungsprogramme werden häufig bei Krebs und anderen Erkrankungen mit gestörter Kontrolle der Genexpression beobachtet, wodurch HNRNPA0 ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien ist.

hnRNP A0 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HNRNPA0-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

hnRNP A0 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HNRNPA0-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HNRNPA0-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen hnRNP A0-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HNRNPA0-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von hnRNP A0-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des hnRNP A0-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HNRNPA0-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.