HNF-4α Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420892-LAC

Hnf4a codifica o fator nuclear hepatocitário 4 alfa (HNF-4α), um fator de transcrição do tipo receptor nuclear que controla redes gênicas necessárias para a diferenciação de hepatócitos, a polaridade epitelial e a homeostase metabólica. Em tecidos de camundongo, o HNF-4α coordena vias que regulam a gliconeogênese, o transporte de lipídios, o metabolismo de ácidos biliares e a desintoxicação de xenobióticos, por meio da regulação direta de programas gênicos enriquecidos no fígado e no epitélio intestinal. A perturbação da atividade do HNF-4α desorganiza o controle transcricional de transportadores e enzimas metabólicas, afetando a sinalização responsiva à insulina e a nutrientes e as funções de barreira epitelial. Consequentemente, Hnf4a é amplamente estudado em modelos de disfunção metabólica, lesão inflamatória e fisiopatologia hepática e intestinal, nos quais a reprogramação transcricional impulsiona o fenótipo.

As Partículas de Ativação Lentivirais HNF-4α (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Hnf4a numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HNF-4α (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Hnf4a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HNF-4α. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Hnf4a e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.