Plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-3β (m): sc-420890

Présentation

Foxa2 code le facteur de transcription de la famille forkhead HNF‑3β, un facteur pionnier qui se fixe à la chromatine compactée afin d’établir et de maintenir des programmes de régulation génique endodermiques. Chez la souris, HNF‑3β coordonne des réseaux transcriptionnels qui contrôlent le développement de l’intestin antérieur et de la notochorde, la spécification de la lignée hépatopancréatique et la différenciation épithéliale, en intégrant des signaux provenant de voies telles que Wnt, TGF‑β/SMAD, Hedgehog et le métabolisme médié par les récepteurs nucléaires. Dans les tissus adultes, FOXA2 influence l’homéostasie du glucose et des lipides en régulant des gènes métaboliques hépatiques et en modulant l’identité des cellules endocrines et épithéliales. Une activité dérégulée de FOXA2 a été associée à des anomalies du développement ainsi qu’à des états pathologiques impliquant une différenciation altérée, une plasticité épithéliale et des dysfonctions métaboliques, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-3β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Foxa2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Foxa2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Foxa2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HNF-3β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Foxa2 pour l'étude de la signalisation de HNF-3β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Foxa2 essentiels à la fonction de HNF-3β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Foxa2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HNF-3β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HNF-3β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Foxa2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HNF-3β plasmide HDR (m) et le HNF-3β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Foxa2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Foxa2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.