HNF-3β CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400210-ACT

FOXA2 kodiert den hepatozytären nukleären Faktor 3‑beta (HNF‑3β), einen Winged‑Helix‑Transkriptionsfaktor, der als Pionierregulator der Chromatinzugänglichkeit und der linien-/gewebespezifischen Genexpression wirkt. Er koordiniert Entwicklungsprogramme und homöostatische Funktionen in endodermabgeleiteten Geweben, darunter Leber, Pankreas und Lunge, indem er Netzwerke steuert, die an epithelialer Differenzierung, Glukose- und Lipidstoffwechsel sowie der Identität sekretorischer Zellen beteiligt sind. FOXA2 ist mit Signalwegen wie Wnt/β‑Catenin, TGF‑β und Notch verknüpft, um Transkriptionszustände und zelluläre Plastizität zu modulieren. Eine fehlregulierte FOXA2‑Aktivität wurde mit veränderter Stoffwechselregulation und aberranten Differenzierungsprogrammen in unterschiedlichen krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebsbiologie und endokrine Funktionsstörungen.

HNF-3β Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FOXA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HNF-3β Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FOXA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FOXA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HNF-3β-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FOXA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HNF-3β-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HNF-3β-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FOXA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.