Plásmido CRISPR de Activación (h) HNF-1β: sc-400537-ACT

HNF1B codifica el factor de transcripción HNF‑1β, un regulador con dominio homeobox esencial para la diferenciación epitelial y el desarrollo de órganos, en particular en linajes de riñón, páncreas e hígado. Controla redes génicas implicadas en el transporte tubular, la polaridad celular y la homeostasis metabólica, e interactúa con vías que moldean la segmentación del nefrón y la identidad del epitelio ductal. La alteración de la expresión o la función de HNF1B se asocia con anomalías del desarrollo renal, fenotipos quísticos y tubulointersticiales, y una regulación anómala del metabolismo de la glucosa compatible con síndromes de diabetes monogénica. En biología del cáncer, HNF‑1β se estudia con frecuencia como un factor de linaje y diferenciación en tumores epiteliales, donde puede influir en programas transcripcionales relacionados con la proliferación y las respuestas al estrés.

HNF-1β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNF1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HNF-1β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNF1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNF1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HNF-1β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNF1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HNF-1β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HNF-1β en células tumorales con expresión de HNF1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.