Plásmido CRISPR de Activación (h) HNF-1α: sc-400594-ACT

HNF1A codifica el factor nuclear 1 alfa de hepatocitos (HNF-1α), un factor de transcripción con homeodominio que gobierna programas génicos epiteliales y hepatopancreáticos. Regula redes que controlan el metabolismo de la glucosa y los lípidos, el transporte de ácidos biliares y xenobióticos, y la polaridad epitelial, al unirse a elementos promotores y potenciadores de dianas específicas de cada tejido. La actividad de HNF-1α integra señales metabólicas y del desarrollo para mantener la identidad y la función de los hepatocitos y de las células beta pancreáticas. La variación genética o la expresión desregulada de HNF1A se asocia con formas monogénicas y complejas de diabetes, así como con fenotipos hepáticos y renales, lo que lo convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de enfermedad metabólica.

HNF-1α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNF1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HNF-1α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNF1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNF1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HNF-1α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNF1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HNF-1α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HNF-1α en células tumorales con expresión de HNF1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.