Plasmide CRISPR/Cas9 KO HMG-I/HMG-Y (h): sc-402396

Présentation

HMGA1 code les protéines architecturales de la chromatine HMG-I et HMG-Y, des facteurs de liaison à l’ADN via des motifs AT-hook qui remodèlent la chromatine afin de moduler la transcription, la réplication et l’organisation du génome à un niveau supérieur. En se liant à des régions régulatrices riches en AT, HMGA1 facilite l’assemblage de l’enhanceosome et influence des programmes transcriptionnels liés à la signalisation, notamment le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et des voies inflammatoires telles que l’expression génique dépendante de NF-κB. Une expression ou une activité dérégulée de HMGA1 est associée à une plasticité cellulaire, une prolifération et une adaptation métabolique altérées, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de réseaux transcriptionnels oncogéniques et de la progression tumorale. HMGA1 affecte également l’accessibilité de la chromatine au niveau de loci spécifiques de lignée, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la régulation épigénétique et l’expression génique en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HMG-I/HMG-Y (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HMGA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HMGA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HMGA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HMG-I/HMG-Y.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HMGA1 pour l'étude de la signalisation de HMG-I/HMG-Y, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HMGA1 essentiels à la fonction de HMG-I/HMG-Y
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HMGA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HMG-I/HMG-Y plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HMG-I/HMG-Y plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HMGA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HMG-I/HMG-Y plasmide HDR (h) et le HMG-I/HMG-Y (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HMGA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HMGA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.