Plasmide Double Nickase (h) HMG-2/HMGB2: sc-404000-NIC

HMGB2 (HMG-2) code une protéine à boîte du groupe « high mobility » qui se lie à l’ADN et le courbe afin de moduler la structure de la chromatine et la régulation transcriptionnelle. HMGB2 participe à la dynamique des nucléosomes, à la communication entre enhancers et promoteurs, ainsi qu’aux réponses aux dommages de l’ADN, influençant la progression du cycle cellulaire, les programmes de sénescence et la différenciation spécifique de lignée. Par ses interactions avec des facteurs de transcription et des complexes de remodelage de la chromatine, elle contribue à coordonner l’organisation du génome lors de la réplication et de la réparation. Une expression dérégulée de HMGB2 et une activité anormale de liaison à la chromatine ont été associées à des signaux prolifératifs, à l’instabilité du génome et à des profils d’expression de gènes inflammatoires altérés, observés dans divers contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans des études sur la dégénérescence tissulaire.

HMG-2/HMGB2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HMGB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HMGB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HMGB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HMGB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.