HJURP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405278-ACT

HJURP (Holliday-Junction-Erkennungsprotein) ist ein zentromerisches Histon-Chaperon, das für eine präzise Chromosomensegregation unerlässlich ist. Es vermittelt die Einlagerung und Aufrechterhaltung der Histon-H3-Variante CENP-A an Zentromeren und koordiniert dadurch den Aufbau des Kinetochors sowie den mitotischen Verlauf als Teil zentraler Prozesse der Zentromer-/Kinetochor-Funktion und der an die DNA-Replikation gekoppelten Chromatin-Erhaltung. Aufgrund seiner Rolle bei der Bewahrung der Zentromer-Identität und der Genomstabilität werden veränderte HJURP-Expression oder -Funktion häufig im Kontext von Replikationsstress, Aneuploidie und proliferationsassoziierten Transkriptionsprogrammen untersucht. Diese Eigenschaften machen HJURP zu einem nützlichen Ziel, um Mitose-Treue, Chromatindynamik und krebsrelevante Zellzyklus-Phänotypen in humanen Zellmodellen zu erforschen.

HJURP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HJURP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HJURP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HJURP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HJURP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HJURP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HJURP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HJURP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HJURP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HJURP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.