Plasmide Double Nickase (h) Histone H3.3A: sc-416802-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Histone H3.3A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Histone H3.3A Double Nickase (h) et le plasmide Histone H3.3A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant H3F3A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Histone H3.3A | sc-416802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Histone H3.3A | sc-416802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H3F3A code la variante d’histone H3.3A, indépendante de la réplication, un composant essentiel des nucléosomes qui est déposée sur les gènes activement transcrits, les éléments régulateurs, les télomères et les sites de dommages de l’ADN. Par une incorporation spécifique à la variante, H3.3 contribue à façonner l’accessibilité de la chromatine et coordonne la régulation transcriptionnelle, l’activité des enhancers et la mémoire épigénétique, tout en influençant la réparation de l’ADN et la stabilité du génome. H3.3A participe aux réseaux de remodelage de la chromatine et de modifications des histones, en interface avec des processus tels que les réponses au stress réplicatif et les programmes de destinée cellulaire. Des altérations récurrentes de H3F3A et une dérégulation du dépôt de H3.3 ont été associées à des états de chromatine aberrants dans des contextes cancéreux et du développement, faisant de ce locus un point central pour les études mécanistiques de la dérégulation épigénétique.
Histone H3.3A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus H3F3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de H3F3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de H3F3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de H3F3A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.