Plasmide Double Nickase (h) Histone H1X: sc-411232-NIC

H1FX code l’histone H1X, une variante d’histone de liaison qui se fixe à l’ADN nucléosomal et contribue à la compaction de la chromatine de haut niveau ainsi qu’à l’organisation du génome. En modulant l’espacement des nucléosomes et l’accessibilité de la chromatine, H1X influence la régulation transcriptionnelle, le calendrier de réplication de l’ADN et les réponses aux dommages de l’ADN au sein des voies de contrôle épigénétique. Une abondance modifiée ou une redistribution des protéines de la famille H1 peut remodeler les états de la chromatine, affectant les programmes d’identité cellulaire et l’expression génique adaptative au stress. Par conséquent, H1FX est fréquemment étudié dans le contexte de la dérégulation de la chromatine, pertinente pour la biologie du cancer, les processus du développement et les phénotypes liés à la stabilité du génome.

Histone H1X Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus H1FX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de H1FX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de H1FX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de H1FX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.