Histone H1⁰ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403716-ACT

O H1F0 codifica a histona H1⁰, uma variante de histona ligante associada à diferenciação que se liga ao DNA nucleossômico para estabilizar a compactação da cromatina de ordem superior e modular a acessibilidade transcricional global. Ao influenciar o espaçamento entre nucleossomos e a condensação da cromatina, a H1⁰ contribui para a regulação epigenética de transições de estado celular, do timing de replicação e de respostas a danos no DNA. Alterações na expressão de H1F0 têm sido relatadas em múltiplos tipos tumorais e contextos de desenvolvimento, nos quais mudanças na organização da cromatina estão ligadas a alterações na proliferação, no comprometimento de linhagem e na adaptação ao estresse celular. Essas características fazem da H1⁰ um alvo útil para estudar a arquitetura da cromatina, programas transcricionais e remodelamento epigenético em células humanas.

Histone H10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de H1F0 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone H10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus H1F0 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição H1F0, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone H10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus H1F0 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone H10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone H10 em células tumorais com expressão de H1F0 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.