Plásmido Doble Nickase (h) Histone Deacetylase 8 (HDAC8): sc-400757-NIC

HDAC8 codifica la desacetilasa de histonas 8, una desacetilasa de clase I dependiente de Zn2+ que elimina grupos acetilo de residuos de lisina en histonas y otras proteínas nucleares para modular la accesibilidad de la cromatina y la producción transcripcional. Mediante la regulación de la dinámica de acetilación, HDAC8 contribuye al control epigenético de la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación y la expresión génica sensible al daño del ADN. La actividad de HDAC8 se intersecta con redes de remodelación de la cromatina y de represión/activación transcripcional que coordinan vías de desarrollo y de respuesta al estrés. La expresión o función desregulada de HDAC8 se ha asociado con estados epigenéticos alterados observados en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda su uso como diana en estudios mecanísticos de regulación génica.

Histone Deacetylase 8 (HDAC8) El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HDAC8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HDAC8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HDAC8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HDAC8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.