Plásmido Doble Nickase (h) Histone Deacetylase 5 (HDAC5): sc-400659-NIC

HDAC5 codifica la desacetilasa de histonas 5, una HDAC de clase IIa que modula la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales al asociarse con complejos correpresores y desacetilar sustratos de histonas y no histónicos. Su actividad se regula de manera dinámica mediante un transporte núcleo-citoplasmático dependiente de la fosforilación, conectando la señalización de calcio y quinasas con el control de la expresión génica. HDAC5 es un nodo clave en vías que gobiernan la diferenciación muscular, la plasticidad neuronal y la transcripción sensible al estrés, incluidas redes dependientes de MEF2. La desregulación de la función y la localización de HDAC5 se ha implicado en estados epigenéticos aberrantes asociados con la biología del cáncer, el remodelado cardíaco y fenotipos neuropsiquiátricos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la regulación de la cromatina.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HDAC5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HDAC5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HDAC5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HDAC5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.