Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone Deacetylase 5 (HDAC5): sc-400659-ACT

HDAC5 codifica la histona desacetilasa 5, una HDAC de clase IIa que modula la accesibilidad de la cromatina y la transcripción al regular la dinámica de acetilación de lisinas en conjunto con represores transcripcionales y correaguladores. La actividad de HDAC5 está estrictamente controlada por un transporte núcleo-citoplasmático dependiente de la fosforilación, lo que vincula las señales de calcio y de quinasas con programas génicos que gobiernan la miogénesis, la plasticidad neuronal y la adaptación metabólica. A través de interacciones con factores como los reguladores transcripcionales de la familia MEF2, HDAC5 ayuda a coordinar redes de diferenciación y de transcripción sensibles al estrés. La expresión o localización desregulada de HDAC5 se ha asociado con estados epigenéticos alterados en la biología del cáncer y con vías relevantes para el remodelado cardíaco y mecanismos de enfermedades neurodegenerativas.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HDAC5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HDAC5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HDAC5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone Deacetylase 5 (HDAC5). A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HDAC5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone Deacetylase 5 (HDAC5) en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone Deacetylase 5 (HDAC5) en células tumorales con expresión de HDAC5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.