Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone Deacetylase 11 (HDAC11): sc-402103-ACT

HDAC11 codifica la Histona Desacetilasa 11, la única HDAC de clase IV, que modula la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales mediante la desacetilación y otras formas de regulación de acil-lisina. En células humanas, HDAC11 participa en el control epigenético de la diferenciación, la adaptación metabólica y la señalización inmunitaria al influir en sustratos histónicos y no histónicos que convergen con vías inflamatorias y de respuesta al estrés. La actividad alterada de HDAC11 se ha asociado con patrones de expresión génica desregulados relevantes para procesos oncogénicos y estados funcionales de las células inmunitarias. Como resultado, HDAC11 se estudia ampliamente en contextos en los que la remodelación de la cromatina determina decisiones de destino celular y redes transcripcionales asociadas a enfermedad.

Histone Deacetylase 11 (HDAC11) El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HDAC11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone Deacetylase 11 (HDAC11) El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HDAC11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HDAC11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone Deacetylase 11 (HDAC11). A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HDAC11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone Deacetylase 11 (HDAC11) en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone Deacetylase 11 (HDAC11) en células tumorales con expresión de HDAC11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.