Histone cluster 1 H3A CRISPR Activation Plasmid (m): sc-436164-ACT

Hist1h3a kodiert Histone cluster 1 H3A, ein kanonisches H3-Protein, das den Kern von Nukleosomen bildet und zur Organisation der Chromatinarchitektur im gesamten Mausgenom beiträgt. Durch posttranslationale Modifikationen wie Methylierung und Acetylierung integriert H3 Signale, die Transkriptionsprogramme, das Timing der DNA-Replikation und die Chromatinzugänglichkeit während Zellzyklus und Entwicklung regulieren. Die Dynamik von Histon H3 trägt zur epigenetischen Vererbung bei und koordiniert zentrale Prozesse wie die Erkennung und Reparatur von DNA-Schäden, die replikationsgekoppelte Nukleosomenassemblierung und die Bildung von Heterochromatin. Eine dysregulierte Histondosierung oder veränderte H3-Modifikationszustände werden vielfach mit Genominstabilität und aberranten Genexpressionsmustern in der Krebsbiologie und bei Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht, was Hist1h3a zu einem nützlichen Knotenpunkt für Forschung zu Chromatin und Epigenetik macht.

Histone cluster 1 H3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Hist1h3a-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Histone cluster 1 H3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Hist1h3a-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Hist1h3a-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Histone cluster 1 H3A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Hist1h3a-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Histone cluster 1 H3A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Histone cluster 1 H3A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Hist1h3a-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.