Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone cluster 1 H1E: sc-402775-ACT

HIST1H1E code l’histone H1E du cluster d’histones 1, un membre de la famille des histones de liaison H1 qui se fixe à l’ADN nucléosomique aux sites d’entrée et de sortie afin de favoriser une compaction de la chromatine d’ordre supérieur et de réguler l’accessibilité du génome. En influençant l’espacement des nucléosomes et l’organisation de la fibre de chromatine, H1E contribue au contrôle transcriptionnel, au calendrier de réplication de l’ADN et à la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN. Les modifications de la stœchiométrie des histones H1 et les états de chromatine associés à H1E sont étudiés dans le contexte de la reprogrammation épigénétique, de la différenciation et de la stabilité du génome, des processus fréquemment perturbés dans le cancer et les troubles du neurodéveloppement. En tant que protéine d’architecture de la chromatine, H1E est également pertinente pour l’étude du stress réplicatif, de la formation de l’hétérochromatine et de l’occupation des facteurs de transcription à l’échelle du génome.

Histone cluster 1 H1E Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HIST1H1E sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone cluster 1 H1E Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HIST1H1E dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HIST1H1E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone cluster 1 H1E. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HIST1H1E natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone cluster 1 H1E au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone cluster 1 H1E dans les cellules tumorales présentant une expression de HIST1H1E silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.