Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
hippocalcin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420938
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- hippocalcin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico hippocalcin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: hippocalcin Anticuerpo (G-8): sc-393125
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
hippocalcin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420938 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Hpca codifica hippocalcina, una proteína neuronal fijadora de calcio con motivo EF-hand de la familia de sensores neuronales de calcio, que acopla los transitorios de Ca2+ a cambios en la señalización sináptica y la excitabilidad. Tras unirse al Ca2+, la hippocalcina sufre un cambio conformacional que puede modular su asociación a la membrana e influir en procesos como la plasticidad sináptica, el tráfico dependiente de la actividad y los programas de expresión génica en neuronas. Participa en redes de señalización dependientes de calcio que se entrecruzan con vías de receptores de neurotransmisores y con cascadas posteriores de quinasas/fosfatasas que modelan la potenciación y la depresión a largo plazo. La homeostasis neuronal del Ca2+ desregulada y la función alterada de los sensores de calcio son relevantes para estudios mecanísticos de fenotipos cognitivos y de disfunción de circuitos asociada a enfermedades neurodegenerativas o neuropsiquiátricas en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO hippocalcin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hpca en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hpca junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hpca tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína hippocalcin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hpca para la investigación de la señalización de hippocalcin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Hpca críticos para la función de hippocalcin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hpca para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido hippocalcin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido hippocalcin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hpca. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR hippocalcin (m) y el plásmido HDR hippocalcin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hpca para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hpca definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.