Hippi CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-412438

Übersicht

IFT57 kodiert eine zentrale Komponente des intraflagellären Transportkomplexes B (IFT‑B) und unterstützt den anterograden Transport von Fracht, die für Aufbau und Erhalt der primären Zilie erforderlich ist. Über seine Rolle in der Ziliogenese trägt IFT57 zu zilienabhängigen Signaltransduktionswegen bei, darunter Hedgehog und weitere rezeptorvermittelte Prozesse, die Entwicklung, Zellzyklusprogression und Gewebehomöostase koordinieren. Eine Störung der IFT‑B‑Funktion ist mit ciliopathieassoziierten Phänotypen verknüpft und wurde mit Erkrankungen in Zusammenhang gebracht, die Skelett-, Nieren- und Retina-Biologie betreffen, wodurch IFT57 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zum zilienären Transport ist. In humanen Zellen wird der Verlust von IFT57 häufig genutzt, um zu untersuchen, wie eine beeinträchtigte Zilienarchitektur Signaloutputs und organellabhängige Transportprozesse verändert.

Das Hippi CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IFT57-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IFT57-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IFT57 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Hippi-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IFT57-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Hippi-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IFT57-Exone abzielen, die für die Hippi-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IFT57-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Hippi CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Hippi CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IFT57-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Hippi HDR-Plasmid (h) und Hippi HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IFT57-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IFT57-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.