Plásmido Doble Nickase (h) HIPK2: sc-402003-NIC

La HIPK2 humana (proteína quinasa 2 que interactúa con homeodominios) es una quinasa de serina/treonina que integra señales de estrés y del desarrollo mediante la fosforilación de reguladores transcripcionales, incluido p53, y la modulación de complejos asociados a la cromatina. Participa en las respuestas al daño del ADN, en programas de apoptosis y senescencia, y en el control transcripcional a través de vías vinculadas a la señalización ATM/ATR, la regulación de Wnt/β-catenina y la expresión génica sensible a TGF-β. HIPK2 también interactúa con el recambio dependiente de ubiquitina y con la dinámica de los cuerpos nucleares, configurando resultados de expresión génica dependientes del contexto. La actividad y la expresión desreguladas de HIPK2 se han asociado con un control de puntos de control alterado, señales de supervivencia aberrantes y biología tumoral, lo que la convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de la estabilidad del genoma y de la transcripción adaptativa al estrés.

HIPK2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HIPK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HIPK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HIPK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HIPK2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.