Plásmido CRISPR de Activación (h) HIP1: sc-402515-ACT

La HIP1 humana (proteína 1 que interactúa con huntingtina) es un adaptador endocítico que conecta los componentes de las fosas recubiertas de clatrina con la actina y los receptores de carga, favoreciendo la formación de vesículas y el tráfico intracelular. Mediante interacciones con la clatrina, AP2 y membranas ricas en fosfoinosítidos, HIP1 influye en la internalización de receptores y en la dinámica de la señalización posterior, incluidas vías relacionadas con el recambio de receptores de factores de crecimiento. La expresión alterada de HIP1 o eventos de fusión se han asociado con señalización desregulada y fenotipos de proliferación celular, lo que la hace relevante para estudios de transformación oncogénica y defectos del tráfico de membrana. HIP1 también se utiliza como marcador en investigaciones de la organización del citoesqueleto y la proteostasis en contextos en los que la señalización dependiente de la endocitosis está alterada.

HIP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HIP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HIP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HIP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HIP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HIP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HIP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HIP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HIP1 en células tumorales con expresión de HIP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.