HIF1a Lentiviral Activation Particles (m): sc-420856-LAC

Das murine Gen **Hif1a** kodiert den hypoxieinduzierbaren Faktor 1 Alpha (HIF1a), einen bHLH‑PAS-Transkriptionsfaktor, der sich bei niedriger Sauerstoffkonzentration stabilisiert und mit ARNT dimerisiert, um die zelluläre Anpassung an Hypoxie zu koordinieren. HIF1a reguliert über Hypoxie‑Response‑Elemente Gene, die am glykolytischen Stoffwechsel, an angiogener Signalgebung, Erythropoese, Eisenhomöostase und am Zellüberleben beteiligt sind, und integriert dabei Signale aus den PI3K–AKT–mTOR‑ und MAPK‑Signalwegen. Seine Aktivität wird durch Prolyl‑Hydroxylierung und VHL‑abhängige Ubiquitinierung kontrolliert und verknüpft so Sauerstoffsensorik mit Proteostase. Eine Fehlregulation der HIF1a‑Signalgebung ist weitreichend an der Tumorhypoxie‑Biologie, ischämiebedingten Stressantworten, chronischer Entzündung und metabolischer Umprogrammierung beteiligt und macht HIF1a zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien sauerstoffabhängiger Transkriptionsprogramme.

HIF1a Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Hif1a-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HIF1a Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Hif1a-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HIF1a-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Hif1a-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.