Plasmide Double Nickase (h) Hic-5: sc-402786-NIC

TGFB1I1 code Hic-5 (également appelé ARA55), un adaptateur d’adhérence focale contenant des domaines LIM, qui intègre les signaux de la matrice extracellulaire avec le remodelage du cytosquelette et des réponses transcriptionnelles. Hic-5 se localise aux adhérences focales et dans le noyau, où il sert d’échafaudage à des complexes de signalisation liés à la voie intégrine/FAK–SRC, à la régulation des GTPases de la famille Rho et aux voies de mécanotransduction qui coordonnent l’adhésion, la migration et la dynamique des fibres de stress. Il est inductible par le TGF-β et participe à des programmes de remodelage dépendants du TGF-β, avec notamment des effets dépendant du contexte sur la transition épithélio-mésenchymateuse et l’activation des fibroblastes. Une activité dérégulée de TGFB1I1/Hic-5 a été associée à l’invasion et à la métastase des cellules cancéreuses, à des réseaux de signalisation fibrosants et au remodelage du microenvironnement inflammatoire, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel dépendant de l’adhérence.

Hic-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TGFB1I1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TGFB1I1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TGFB1I1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TGFB1I1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.