Plasmide Double Nickase (h) HGK: sc-403395-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HGK correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HGK Double Nickase (h) et le plasmide HGK Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MAP4K4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HGK Antibody (5-12): sc-100445
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HGK | sc-403395-NIC | 20 µg | $410.00 |
MAP4K4 code la kinase sérine/thréonine HGK, un régulateur en amont de la signalisation sensible au stress qui relie des signaux proximaux à la membrane aux cascades MAPK, notamment les voies JNK et p38. HGK contribue au remodelage du cytosquelette, à la migration cellulaire, à la signalisation inflammatoire et à la régulation métabolique via la modulation de réseaux de kinases et de nœuds de signalisation dépendants d’adaptateurs. Dans les cellules humaines, une activité altérée de MAP4K4 a été associée à des modifications de la signalisation de l’insuline, du comportement des cellules endothéliales et immunitaires, ainsi qu’à des effets dépendants du contexte sur la prolifération et l’invasion. Ces propriétés font de MAP4K4/HGK une cible utile pour disséquer la connectivité des voies pilotées par les kinases et pour cartographier les dépendances de signalisation dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.
HGK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAP4K4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAP4K4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAP4K4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAP4K4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.