Plasmide CRISPR d'Activation (h) HGF: sc-400433-ACT

Le facteur de croissance des hépatocytes (HGF) est une cytokine pléiotrope sécrétée qui signale principalement via la tyrosine kinase réceptrice MET afin de réguler les interactions épithélio-mésenchymateuses, la survie cellulaire, la prolifération, la motilité et la morphogenèse de ramification. L’activation de l’axe HGF–MET engage en aval les voies PI3K–AKT, RAS–MAPK, STAT ainsi que la signalisation des adhésions focales, en intégrant des signaux qui façonnent la réparation et le remodelage tissulaires. Une expression dérégulée de HGF ou une hyperactivation de la voie est fréquemment étudiée dans l’invasion tumorale, les métastases, l’angiogenèse et le dialogue stroma–tumeur, ainsi que dans les microenvironnements fibreux et inflammatoires. En tant que modulateur dépendant du contexte de la plasticité cellulaire, HGF est largement utilisé pour explorer la signalisation paracrine et les phénotypes induits par le microenvironnement dans des modèles cellulaires humains.

HGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HGF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HGF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HGF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HGF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HGF dans les cellules tumorales présentant une expression de HGF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.