Hex Double Nickase Plasmid (h): sc-403827-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Hex Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Hex Double-Nickase-Plasmid (h) und Hex Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HHEX abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Hex: sc-81284
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Hex Double Nickase Plasmid (h) | sc-403827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hex Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das menschliche Gen HHEX kodiert Hex, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die Festlegung von Zelllinien und die Organogenese koordiniert, mit ausgeprägten Funktionen in der Musterbildung des Endoderms und der frühen hämatopoetischen Entwicklung. Hex integriert kontextabhängige Transkriptionsprogramme, die über regulatorische Netzwerke, die sich mit entwicklungsbiologischen Signalwegen wie Wnt, BMP und TGF-β überschneiden, Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Differenzierung beeinflussen. In ausgereiften Geweben trägt HHEX zur Biologie von Gefäß- und Immunzellen bei, und eine fehlregulierte Expression wurde bei mehreren Malignomen mit veränderten Differenzierungszuständen und onkogenen transkriptionellen Schaltkreisen in Verbindung gebracht. Da HHEX als Knotenpunkt in entwicklungs- und hämatopoesebezogenen Genregulationsnetzwerken fungiert, wird es häufig untersucht, um Enhancer-Nutzung, Transkriptionsziele und kontextspezifische Chromatinzustände zu kartieren.
Hex Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HHEX-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HHEX abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HHEX-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HHEX-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.