Hex CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403827-ACT

Das humane HHEX-Gen kodiert Hex, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die Linienzellfestlegung und die Organogenese reguliert und dabei eine wichtige Rolle in der frühen Musterbildung des Endoderms, der hämatopoetischen Entwicklung und der Gefäßbiologie spielt. Hex koordiniert Transkriptionsprogramme, die Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Differenzierung steuern, über sequenzspezifische DNA-Bindung sowie durch die Interaktion mit koregulatorischen Komplexen. In adulten Geweben trägt HHEX zur Aufrechterhaltung der immunologischen und metabolischen Homöostase bei; eine dysregulierte Expression wurde mit veränderter hämatopoetischer Differenzierung und onkogenen Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht. Genetische und Expressionsstudien bringen HHEX zudem mit kardiometabolischen Merkmalen in Zusammenhang, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in der Forschung zu endokrinen und inflammatorischen Signalwegen unterstützt.

Hex Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HHEX-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Hex Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HHEX-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HHEX-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Hex-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HHEX-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Hex-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Hex-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HHEX-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.