hepcidin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-429976

Übersicht

Das murine Gen **Hamp** kodiert **Hepcidin**, ein in der Leber gebildetes Peptidhormon, das als zentraler Regulator der systemischen Eisenhomöostase fungiert. Hepcidin bindet an den Eisenexporter **Ferroportin (SLC40A1)** und löst dessen Internalisierung und Abbau aus; dadurch werden die intestinale Eisenaufnahme begrenzt und die Eisenfreisetzung aus Makrophagen und Hepatozyten kontrolliert. Seine Transkription wird durch inflammatorische Signalwege wie **IL-6/STAT3** sowie durch eisen-sensierende Signalwege einschließlich **BMP/SMAD** gesteuert und verknüpft damit angeborene Immunität mit dem Eisenstoffwechsel. Eine Fehlregulation der Hepcidin–Ferroportin-Achse ist an Zuständen mit Eisenüberladung ebenso wie an eisenrestriktiven Zuständen beteiligt und wird häufig in Modellen der Entzündungsanämie, hämochromatoseähnlicher Phänotypen und der infektionsassoziierten „nutritional immunity“ untersucht.

Das hepcidin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hamp-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hamp-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hamp nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die hepcidin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hamp-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der hepcidin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hamp-Exone abzielen, die für die hepcidin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hamp-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom hepcidin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom hepcidin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hamp-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das hepcidin HDR-Plasmid (m) und hepcidin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hamp-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hamp-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.