Hemoglobin δ Double Nickase Plasmid (h): sc-401567-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Hemoglobin δ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Hemoglobin δ Double-Nickase-Plasmid (h) und Hemoglobin δ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HBD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Hemoglobin δ Double Nickase Plasmid (h) | sc-401567-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hemoglobin δ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401567-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HBD kodiert die Delta‑Untereinheit des Hämoglobins (Hämoglobin δ), ein hämhaltiges Sauerstofftransportprotein, das sich in erythroiden Zellen mit Alpha‑Globin zu Hämoglobin A2 zusammenlagert. Seine Expression ist eng an Erythropoese und Häm‑Biosyntheseprogramme gekoppelt und fügt sich in die Regulation der Globingene am β‑Globin‑Lokus sowie in Reifungswege der roten Blutkörperchen ein. Variation in HBD und seinem regulatorischen Kontext kann die Hämoglobinzusammensetzung beeinflussen und wird zusammen mit den β‑ähnlichen Globingenen bei Erkrankungen untersucht, die das Hämoglobingleichgewicht und die Erythrozytenphysiologie betreffen. Als Marker innerhalb des Globin‑Clusters ist HBD zudem nützlich, um Lokus‑Kontrolle, entwicklungsabhängiges Umschalten (Switching) und Transkriptionsregulation in Modellen der hämatopoetischen Differenzierung zu untersuchen.
Hemoglobin δ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HBD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HBD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HBD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HBD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.