Plasmide CRISPR/Cas9 KO HECTD1 (h): sc-409864

Présentation

HECTD1 code une ligase E3 de type HECT qui médie l’ubiquitination de ses substrats afin de réguler la protéostasie, le renouvellement des protéines et l’amplitude de la signalisation dans de nombreux contextes cellulaires. En contrôlant le trafic et la dégradation dépendants de l’ubiquitine de composants des voies de signalisation, HECTD1 peut influencer des processus tels que la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et la dynamique du cytosquelette, qui reposent sur un remodelage opportun des réseaux protéiques. Une activité de ligase E3 dérégulée est fréquemment associée à une altération de la fidélité de la signalisation et à des phénotypes cellulaires aberrants, faisant de HECTD1 un nœud pertinent pour étudier le fonctionnement du système ubiquitine–protéasome dans les cellules humaines. Les travaux sur HECTD1 soutiennent l’exploration mécanistique de la manière dont l’ubiquitination s’interface avec des programmes de signalisation importants pour le développement et associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HECTD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HECTD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HECTD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HECTD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HECTD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HECTD1 pour l'étude de la signalisation de HECTD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HECTD1 essentiels à la fonction de HECTD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HECTD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HECTD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HECTD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HECTD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HECTD1 plasmide HDR (h) et le HECTD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HECTD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HECTD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.