Particules Lentivirales d'Activation (h2) HEATR5B: sc-412293-LAC-2

Le gène humain HEATR5B code une protéine contenant des répétitions HEAT, supposée agir comme une protéine d’échafaudage pour des interactions protéine-protéine qui soutiennent l’assemblage coordonné de complexes macromoléculaires et l’organisation intracellulaire. Sur la base de la biologie conservée des répétitions HEAT, HEATR5B devrait influencer des processus tels que le transport nucléocytoplasmique, la dynamique du cytosquelette et la régulation de voies de signalisation et de voies liées au cycle cellulaire, en modulant la localisation et la stabilité des protéines partenaires. Une expression altérée ou des variations affectant les facteurs d’échafaudage à répétitions HEAT sont fréquemment associées à une perturbation de la protéostasie et des réponses au stress cellulaire, des mécanismes pertinents pour la biologie des maladies prolifératives et neurodéveloppementales. Les modèles de perturbation de HEATR5B sont donc utiles pour explorer la connectivité des voies, cartographier les réseaux d’interactions et évaluer les conséquences transcriptomiques et phénotypiques en aval dans des systèmes cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales HEATR5B (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HEATR5B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HEATR5B (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HEATR5B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HEATR5B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HEATR5B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.