hDcp2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418511-ACT

Das humane Gen **DCP2** kodiert **hDcp2**, ein mRNA-Decapping-Enzym, das die 5′-Kappe entfernt und damit den 5′→3′-Abbau von mRNA einleitet, wodurch Transkriptumsatz und Proteomdynamik geprägt werden. hDcp2 wirkt in zytoplasmatischen mRNA-Processing-Bodies (P-Bodies) und interagiert mit Decapping-Kofaktoren und Exonukleasen, um RNA-Überwachung, stressresponsive Genexpression sowie Qualitätskontrollwege wie den nonsense-mediated decay (NMD) zu regulieren. Durch die Modulation der Stabilität spezifischer mRNA-Subsets beeinflusst DCP2 die Zellzykluskontrolle, Differenzierungsprogramme und die Ausgänge inflammatorischer Signalwege. Fehlregulierter mRNA-Abbau und veränderte P-Body-Dynamik infolge veränderter Decapping-Aktivität sind relevant für Mechanismen, die in der Krebsbiologie, Neurobiologie und bei viralen Wirt–RNA-Interaktionen untersucht werden.

hDcp2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DCP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

hDcp2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DCP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DCP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen hDcp2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DCP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von hDcp2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des hDcp2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DCP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.