HCN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420813

Übersicht

Hcn2 kodiert den hyperpolarisationsaktivierten, zyklische Nukleotide steuernden Ionenkanal 2 (HCN2), einen Ionenkanal, der den Ih-Strom vermittelt und zur Schrittmacheraktivität, Membranerregbarkeit und rhythmischen Entladungsmustern in Neuronen und Kardiomyozyten beiträgt. HCN2 verknüpft Hyperpolarisation mit der Signalübertragung über zyklische Nukleotide und koppelt damit cAMP/PKA-Dynamiken an Veränderungen der Aktionspotenzialschwelle und der Feuerungsfrequenz. Im Nervensystem beeinflusst HCN2 die sensorische Verarbeitung und Netzwerkoszillationen, indem es die dendritische Integration und die synaptische Responsivität reguliert. Eine fehlregulierte HCN2-Funktion wurde in Mausmodellen mit veränderten Erregbarkeits-Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Untersuchungen zu Schmerzbahnen, epilepsierelevanten Mechanismen und der kardialen Erregungsleitung von Bedeutung sind.

Das HCN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hcn2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hcn2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hcn2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HCN2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hcn2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HCN2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hcn2-Exone abzielen, die für die HCN2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hcn2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HCN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HCN2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hcn2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HCN2 HDR-Plasmid (m) und HCN2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hcn2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hcn2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.