Plasmide CRISPR d'Activation (h) HBO1: sc-416462-ACT

Le gène humain KAT7 code l’acétyltransférase d’histones HBO1, une enzyme de la famille MYST qui acétyle les histones H4 et H3 afin de favoriser l’accessibilité de la chromatine et la compétence transcriptionnelle. HBO1 agit au sein de complexes multiprotéiques qui couplent la régulation épigénétique à l’octroi de licence de réplication de l’ADN, en soutenant l’assemblage du complexe de pré-réplication et la progression de la phase S. Par ses rôles dans le remodelage de la chromatine, le contrôle de l’expression génique et le maintien du génome, KAT7/HBO1 est fréquemment étudié dans les voies régissant la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses aux dommages de l’ADN. Une acétylation des histones dérégulée et des états de chromatine associés à la réplication impliquant HBO1 ont été impliqués dans des programmes transcriptionnels oncogéniques et d’autres maladies liées à une instabilité épigénétique.

HBO1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KAT7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HBO1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KAT7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KAT7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HBO1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KAT7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HBO1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HBO1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KAT7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.