Hbb-y Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420805

Descripción general

Hbb-y codifica una subunidad beta tipo hemoglobina de ratón que contribuye al ensamblaje del tetrámero de hemoglobina y al transporte de oxígeno en los eritrocitos. Como parte del programa de diferenciación eritroide, la expresión de Hbb-y se coordina con la biosíntesis del hemo, el equilibrio de las cadenas de globina y las vías de maduración de los glóbulos rojos reguladas por redes transcripcionales eritroides. Las alteraciones en genes tipo beta-globina pueden perturbar la estabilidad de la hemoglobina y la fisiología de los eritrocitos, proporcionando modelos para estudiar mecanismos relevantes para la anemia, las hemoglobinopatías y la eritropoyesis de estrés. En ratones, Hbb-y también es útil para analizar la regulación dependiente del desarrollo y específica de la cepa dentro del clúster génico de la beta-globina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Hbb-y (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hbb-y en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hbb-y junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hbb-y tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Hbb-y.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hbb-y para la investigación de la señalización de Hbb-y, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hbb-y críticos para la función de Hbb-y
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hbb-y para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Hbb-y CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Hbb-y CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hbb-y. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Hbb-y (m) y el plásmido HDR Hbb-y (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hbb-y para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hbb-y definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.