HB9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402097

Übersicht

MNX1 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HB9, einen DNA-bindenden Regulator, der für die embryonale Musterbildung und die Festlegung von Zelllinien essenziell ist, insbesondere in sich entwickelnden Motoneuronen des Rückenmarks und in Pankreasvorläuferzellen. HB9 steuert Transkriptionsprogramme, die neuronale Differenzierung, Axonführung und die Einschränkung des Zellschicksals regulieren, indem es nachgeschaltete Netzwerke von Entwicklungsregulatoren koordiniert. Eine fehlregulierte MNX1-Expression oder eine abnorme HB9-Aktivität wurde mit veränderten Differenzierungszuständen und onkogenen Transkriptionsprogrammen in hämatologischen sowie soliden Tumorkontexten in Verbindung gebracht. Als entwicklungsbiologischer Transkriptionsfaktor wird MNX1 häufig untersucht, um genregulatorische Schaltkreise, Übergänge im Chromatinzustand und kontextabhängige Effekte auf Proliferation und Differenzierung zu definieren.

Das HB9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MNX1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MNX1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MNX1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HB9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MNX1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HB9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MNX1-Exone abzielen, die für die HB9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MNX1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HB9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HB9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MNX1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HB9 HDR-Plasmid (h) und HB9 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MNX1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MNX1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.