HAS2 Double Nickase Plasmid (m): sc-420798-NIC

Das Mausgen **Has2** kodiert die Hyaluronan-Synthase 2 (HAS2), eine membranassoziierte Glykosyltransferase, die Hyaluronan an der Plasmamembran polymerisiert und in die extrazelluläre Matrix exportiert. Die durch HAS2 angetriebene Hyaluronanproduktion reguliert den Aufbau der perizellulären Matrix, die Gewebehydratation sowie die Zell‑Matrix‑Signalübertragung, die über Signalwege unter Beteiligung von CD44 und RHAMM sowie durch Zytoskelett‑Remodelling Adhäsion, Migration und Proliferation beeinflusst. Die Has2‑Aktivität ist eng mit der Entwicklungs‑Morphogenese, der Wundheilung, inflammatorischer Signalgebung und der Aktivierung von Fibroblasten verknüpft; eine gestörte Hyaluronan‑Homöostase wird mit Fibrose, vaskulärem Remodelling und der tumorgeassoziierten Stromabiologie in Verbindung gebracht. Als zentraler Determinant der Mechanik der extrazellulären Matrix und der Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren wird Has2 häufig im Kontext der epithelial‑mesenchymalen Transition, der Angiogenese und des Traffickings von Immunzellen untersucht.

HAS2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Has2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Has2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Has2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Has2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.