HAS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401032-ACT

O HAS2 humano codifica a hialuronano sintase 2, uma enzima da membrana plasmática que polimeriza o hialuronano, um importante glicosaminoglicano da matriz extracelular que regula a hidratação tecidual, a viscoelasticidade e a montagem da matriz pericelular. A produção de hialuronano impulsionada por HAS2 molda programas de adesão e migração celular por meio da sinalização de CD44 e RHAMM e se cruza com EMT, sinais inflamatórios e vias de mecanotransdução que remodelam o microambiente tumoral e o estroma fibrótico. O controle transcricional de HAS2 integra entradas de TGF-β, NF-κB e sinalização por fatores de crescimento, conectando a dinâmica da matriz extracelular a programas proliferativos e de resposta ao estresse. A atividade desregulada de HAS2 e o acúmulo de hialuronano são frequentemente estudados na invasão e metástase do câncer, fibrose, remodelamento vascular e patologias inflamatórias.

HAS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HAS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HAS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HAS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HAS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HAS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HAS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HAS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HAS2 em células tumorais com expressão de HAS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.