HARE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405069

Descripción general

STAB2 codifica el receptor de hialuronano para endocitosis (HARE), un receptor depurador multifuncional expresado predominantemente en las células endoteliales sinusoidales del hígado y en determinadas poblaciones de la línea de los macrófagos. HARE media la captación dependiente de clatrina y la eliminación lisosomal de hialuronano y de diversos ligandos aniónicos, conectando el recambio de la matriz extracelular con la endocitosis mediada por receptores y la homeostasis vascular. Mediante la regulación del catabolismo del hialuronano y el tráfico de glicosaminoglicanos circulantes, STAB2 influye en la señalización inflamatoria, la dinámica de adhesión de leucocitos y los programas de remodelación tisular. La actividad alterada de STAB2 se ha asociado con un manejo desregulado del hialuronano en contextos de fibrosis y enfermedades inflamatorias, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de biología de la matriz y de vías de depuración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HARE (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STAB2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STAB2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STAB2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HARE.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STAB2 para la investigación de la señalización de HARE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de STAB2 críticos para la función de HARE
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STAB2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HARE CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HARE CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STAB2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HARE (h) y el plásmido HDR HARE (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STAB2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STAB2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.