HAPLN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419816

Übersicht

Hapln1 kodiert das Hyaluronan- und Proteoglykan-Verknüpfungsprotein 1 (HAPLN1), eine Komponente der extrazellulären Matrix (ECM), die Hyaluronan–Proteoglykan-Aggregate stabilisiert und die strukturelle Organisation perizellulärer Matrizen unterstützt. Durch die Verstärkung der Wechselwirkungen zwischen Hyaluronan und Chondroitinsulfat-Proteoglykanen trägt HAPLN1 zur Integrität von Knorpel- und Bindegewebe bei und beeinflusst Zelladhäsion, Mechanotransduktion und matrixabhängige Signalwege. Seine Aktivität ist eng mit Prozessen des ECM-Aufbaus und -Umbaus verknüpft, die sich mit Signalwegen überschneiden, welche die Gewebeentwicklung, Entzündung und Fibrose steuern. Eine dysregulierte, HAPLN1-assoziierte Matrixarchitektur wurde mit degenerativen Gelenkphänotypen sowie umfassenderen stromalen Veränderungen in Verbindung gebracht, die Zellmigration und Gewebehomöostase modulieren können.

Das HAPLN1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hapln1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hapln1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hapln1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HAPLN1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hapln1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HAPLN1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hapln1-Exone abzielen, die für die HAPLN1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hapln1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HAPLN1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HAPLN1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hapln1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HAPLN1 HDR-Plasmid (m) und HAPLN1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hapln1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hapln1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.